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潔凈室質(zhì)量控制及其檢測(cè)方面的討論

更新時(shí)間:2015-03-30點(diǎn)擊次數(shù):1959

關(guān)鍵詞:潔凈室 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 檢測(cè) 空氣微生物 懸浮粒子 制藥 生物制品 

  潔凈室對(duì)于制藥工業(yè)的重要意義已為人們肯定。生物制品 是制 藥工業(yè)的一部分,對(duì)生產(chǎn)廠房有很高的潔凈要求。Gilland等曾在市售的 嗜酸乳桿菌產(chǎn)品中,分離到人為污染的短乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌和植物乳桿菌等。生物制品生產(chǎn)中,尤其是活菌、活疫苗的生產(chǎn)中,經(jīng)常受到不同程度的污染,因此,不僅 需要重視潔凈室的建立,更要重視質(zhì)量控制方法及標(biāo)準(zhǔn)。

  朝鮮戰(zhàn)爭(zhēng)中,美國(guó)發(fā)現(xiàn)大量電子儀器失靈,后找到了主要原因,是灰塵在作怪,促成了潔 凈技術(shù)的起步。1961年,誕生了世界上早的潔凈室標(biāo)準(zhǔn),既美國(guó)*技術(shù)條令203,1963 年,頒布了上的潔凈室標(biāo)準(zhǔn):美國(guó)聯(lián)邦FS209。1966年,頒布了修訂后209A, 時(shí)1992年,建立了迄今被廣泛采用的209E。上為了加強(qiáng)藥品、生物制品質(zhì)量管理規(guī)范 (GMP),把潔凈室定為*的生產(chǎn)硬件之一。GMP對(duì)廠房、設(shè)備等,明確規(guī)定了相應(yīng)的潔凈要 求,并制訂了有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

  1 潔凈室的污染源

  潔凈室污染源按性質(zhì)可分物理、化學(xué)、生物等。直徑在0.001-1000μm的固態(tài)、液態(tài)或二者 的混合物質(zhì),包括生物粒子和非生物粒子,我們稱(chēng)為懸浮粒子(airborne particles)。微生 物一般以無(wú)生命的粒子作載體而懸浮,以氣溶膠(Aerosol)形式存在于空氣中,1μm以下 者永外懸浮,10μm以上者會(huì)逐漸沉下來(lái)而形成菌塵。潔凈室污染可分為外部污染和內(nèi)部污 染。外部污染指大氣塵污染,可以通過(guò)光電法測(cè)得。內(nèi)部污染,是由人和有關(guān)的物品、設(shè)備 等引起的。人是潔凈室大的污染源,占90%左右。人和環(huán)境造成了潔凈室的污染,所以在 潔凈室中,人的數(shù)量和活動(dòng)應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制。一般男性每人每分鐘向周?chē)欧?000個(gè)以 上的含菌粒子,女性為750個(gè)以上。穿衣服時(shí),靜止態(tài)發(fā)菌量為10-300個(gè)/min·人,行走時(shí) 的發(fā)菌量為900-2500個(gè)/min·人??人砸淮伟l(fā)菌量為70-700個(gè)/min·人,噴嚏一次為400-60 0個(gè)/min·人。

  2 潔凈室質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

表1 世界主要國(guó)家潔凈室標(biāo)準(zhǔn)(潔凈度)


美國(guó)日本西德美國(guó)澳大利 亞法國(guó)歐共體中國(guó)
Fed Std


  209

JACA


  Std No24

VDI


  2083

BSI


  BS 5295

AS


  AS 1386

AFNOR


  X.44101

EEC


  GMP

GB
-1------
-20-----
131C0.035---
1042D0.35---
10053E orF3.54000A/B100
100064GorH3540000--
1000075J350400000C10000
10000086K35004000000D100000
--7L----
---M----



   潔凈室是指空氣潔凈度達(dá)到規(guī)定要求的可供人類(lèi)工作的場(chǎng)所 ,其功能是控制微粒的污染 。一般按用途可分為:1.工業(yè)潔凈室,以無(wú)生命的微粒為控制對(duì)象;2.生物潔凈室,主要 控制微生物對(duì)工作對(duì)象的污染。

  世界主要國(guó)家的潔凈室標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。美國(guó)是世界上早頒布潔凈室標(biāo)準(zhǔn)的 國(guó)家,各國(guó)的潔凈室標(biāo)準(zhǔn)都是在美準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,結(jié)合各國(guó)的實(shí)際情況而制訂的,我國(guó)的 標(biāo)準(zhǔn)基本上參照美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)和歐共體的標(biāo)準(zhǔn)而制訂的。

  3 潔凈室質(zhì)控的檢測(cè)方法及討論

  3.1 塵埃粒子 由于空氣中存在大量塵埃粒子,而微生物大多依附于這些塵埃粒子隨空氣流動(dòng)造成污染。制 藥工業(yè)用多種方法獲得無(wú)菌狀態(tài),過(guò)濾法以其捕集率高,又經(jīng)濟(jì)而被廣泛使用。其中,特別 應(yīng)該提到的是采用了HEPA(High Eicienoy Particulate Air)過(guò)濾器,對(duì)0.3μm以上空氣 粒子捕集率高達(dá)99.97%以上,除濾過(guò)病毒外,空氣中所有微生物顆??杀粸V除。因此, 正常潔凈室是無(wú)菌的,但是,由于人、物、環(huán)境等污染因素,潔凈室往往受到不同程度 污染。因此,我們多采用激光塵埃粒子計(jì)數(shù)且進(jìn)行監(jiān)控。標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。

表2 外有關(guān)懸浮粒子的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)(塵粒數(shù)/m3)


潔凈度

  

中國(guó)衛(wèi)生部

  GMP

美 國(guó)

  FS-209.

世界衛(wèi)生組織及

  歐共體GMP

≥0.5μm≥5μm≥0.5μm≥5 μm≥0.5μm≥5μm
100≤350003530-3500-
10000≤350000≤200035300024703500002000
100000≤3500000≤2000035300002470035000002000


  3.2 空氣微生物 空氣中活微生物大多依附塵埃粒子而形成生物活性粒子。應(yīng)用細(xì)菌采樣器抽取一定量的空氣 使其滯留在培養(yǎng)基上,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。早在現(xiàn)代微生物問(wèn)世之前,人們就認(rèn)為某些疾 病是由被稱(chēng)為“瘴氣"的空氣污染而引起。20世紀(jì)30年代,英國(guó)研制porton液體采樣器,美 國(guó)研制了AGI液體采樣器。1941年,Bourdion使用裂縫式采樣器,成為空氣微生物采樣測(cè)定 的開(kāi)端。1956年,報(bào)道了*個(gè)篩孔撞擊式采樣器,1958年A.A.Andersn對(duì)其加以改進(jìn)并 定型生產(chǎn),稱(chēng)為安德森(Anderson)空氣微生物采樣器。它由頂罩、6節(jié)篩板、3個(gè)彈簧及抽氣 孔和動(dòng)力裝置構(gòu)成。目前,這種采樣器已發(fā)展到8級(jí),并有許多改進(jìn)型。由于它采集粒譜廣 、效率高、生物失活率低等原因而廣泛使用今??諝馕⑸锊蓸悠饕话惴譃槠叽箢?lèi):液體 式、固體式、沉降式、離心式、光散射式和大容量式。本文將對(duì)離心式空氣微生物采樣器(R CS)作詳細(xì)討論??諝馕⑸餃y(cè)試標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3。

表3 外有關(guān)空氣微生物的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)(CFU/m3) 

潔凈度美國(guó)NASAWHO和歐 共體GMP中國(guó)衛(wèi)生部GMP
1003.55≤5
1000017.6100≤100
10000088.4500≤500



  3.3 表面微生物 為了檢測(cè)潔凈室中墻壁、地板、儀器表面、桌 面、門(mén)把等帶菌情況,通常選用接觸壓印法(Cortact)和棉拭法(Swabbing)等方法。需要時(shí) ,還可與過(guò)濾裝置相結(jié)合來(lái)完成棉拭采樣。1941年,Walter和Hvcker報(bào)道了COntact瓊脂平 板方法,以后,Angelotti和Fotert等作了進(jìn)一步的工作。帶菌狀況都有要求,歐共體GMP( 草案)規(guī)定,100級(jí):平均菌落數(shù)不可過(guò)5 個(gè);1000級(jí):25個(gè);100000級(jí):50個(gè)。表面微生物的檢測(cè),越來(lái)越受到人們的重視。

  3.4 關(guān)于沉降平皿(Settle plate) 1881年Kock創(chuàng)立。依靠空氣中的粒子自然沉降于瓊脂平板上的這種采集方法,由于粒子沉降 的速率很慢,如需采集到有效數(shù)量的粒子,就需暴露很長(zhǎng)時(shí)間。但因空氣中的致病菌數(shù)量是 很少的,金黃色菌菌球菌在醫(yī)院病房空氣中平均每140升才有一個(gè)活菌粒子,為了彌補(bǔ)這個(gè) 缺陷,曾采用直徑為14公分的大平皿,以增加瓊脂的暴露面積。Harding和Williams還曾用 一種多層平板的方法來(lái)進(jìn)一步暴露面積,每層放一個(gè)14公分直徑的平板,但結(jié)果不堪滿意。

  奧姆梁斯基曾試圖把采樣后平板上長(zhǎng)出的菌落換算成一定體積空氣中的微生物含量,以便能 利用沉降平板法的采樣結(jié)果來(lái)測(cè)定空氣中的活菌濃度。為此,他設(shè)定了在100cm2營(yíng)養(yǎng)瓊脂 上暴露5分鐘后,培養(yǎng)長(zhǎng)出的菌落,即相當(dāng)于10升空氣中的活菌數(shù)。由于懸浮在空氣中的含 菌粒子直徑不過(guò)100μm,這些小粒子在空氣中的沉降受空氣阻力的影響,其沉降速率遵循 上的Stokes公式。根據(jù)這個(gè)公式,粒子的沉降速率與其大小成正比,但是,奧姆梁斯基 恰好忽略了這一點(diǎn),因此,它是不能成立的。例如,直徑1μm的含菌粒子,在5分鐘內(nèi)沉降 距離為1.05cm,大部分的粒子就沉降不到瓊脂表面上。

  由于潔凈室已濾除了大部分大顆粒,一般用此法是無(wú)意義的。但是,人為、環(huán)境和潔凈裝置 故障等原因引起的較大顆粒污染以及沉降平板采樣潔的簡(jiǎn)便,可作為日常監(jiān)測(cè)潔凈室水平的 一種參考方法。

  3.5 關(guān)于RCS[9] 離心式空氣采樣器(The Reuter Centrifugal Sampler,RCS)被介紹作為一種在醫(yī)院使用的檢 測(cè)空氣微生物的儀器,由于它輕便,無(wú)噪音而廣泛使用,并擴(kuò)展到制藥工業(yè)等領(lǐng)域。RCS通 過(guò)離心收集顆粒,為制藥工業(yè)所接受,因?yàn)樗坪醴螰DA所描述的“Active"采樣儀器。 。Gre-schel等認(rèn)為它相當(dāng)有效,Macher等則持反對(duì)意見(jiàn)。多年來(lái),許多者了帶菌 顆粒的大小,結(jié)論是:5-15μm,中等粒是13μm,而4μm以下很少。這些結(jié)果是從醫(yī)院、手 術(shù)室、辦公室、實(shí)驗(yàn)室和制藥無(wú)菌室所獲得。他們認(rèn)為,如果顆粒大小是已知的,RCS可定 量測(cè)定細(xì)菌濃度,但是,目前這些顆粒大小是未知的,故不能把它視為定量采樣器,只能歸 于沉降平皿一樣的類(lèi)型。Delmore等發(fā)現(xiàn),100級(jí)無(wú)菌室中,RCS/slit比率是2.1,即RCS是s lit采樣器微生物捕促率的210%有效。我國(guó)丁璽華等也仿制了RCS,選用國(guó)產(chǎn)元件,試制了LW C-1型離心式空氣采樣器。

  雖然RCS有正反兩方面的爭(zhēng)議,但由于它有許多優(yōu)點(diǎn),并明顯優(yōu)于沉降平皿,1986年,西方 近一半的制藥公司采用了RCS,作為空氣微生物采樣器,我國(guó)正在逐漸推廣。



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